發布日期：2022-10-09 點擊率：90
超微量分光光度計是一類很重要的分析儀器 ,無論在物理學、化學、生物學、醫學、材料學、環境科學等科學研究領域 ,還是在化工、醫藥、環境檢測、冶金等現代生產與管理部門 ,紫外可見分光光度計都有廣泛而重要的應用。
超微量分光光度計是一類很重要的分析儀器 ,無論在物理學、化學、生物學、醫學、材料學、環境科學等科學研究領域 ,還是在化工、醫藥、環境檢測、冶金等現代生產與管理部門 ,紫外可見分光光度計督有廣泛而重要的應用。分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。超微量分光光度計已成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
核酸的定量核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的系數。如：1OD 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數的換算，從而得出相應的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現出的吸光值漂移越大。
事實上，分光光度計的設計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內變化，即儀器有一定的準確度和精確度。如德國伯赫Colibri超微量分光光度計的準確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測試時，離子濃度太高，也會導致讀數漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計的測試范圍)。最后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現負值;混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
標簽: 超微量分光光度計
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